Pcambia Vectors Binary Options

Entwicklung eines neuen pCAMBIA-Binärvektors mit Gateway-Technologie Empfangen am 23. Juni 2015. Überarbeitet am 17. Juli 2015. Angenommen am 18. Juli 2015. Verfügbar am 23. Juli 2015. pCAMBIA-Vektoren sind für ihre einfache Handhabung, Stabilität und das Vorhandensein einer Auswahl an Auswahl bekannt geworden Und Reportergene. Jedoch haben diese Vektoren das Gateway-Klonierungssystem noch nicht integriert, was eine ortsspezifische Rekombination ohne die Notwendigkeit von Restriktionsenzymen und Ligasen ermöglicht hat. Dieses Papier beschäftigt sich mit der Umwandlung des pCambia2300-Binärvektors in einen Zielvektor mit der vom CaMV35S-Promotor getriebenen Gateway-Kassette. Der Zielvektor, pCamway35S, wurde dann unter Verwendung des uidA-Reportergens ausgewertet. Transiente und stabile Transformationsexperimente wurden erfolgreich getestet, entweder durch Partikelbombardierung oder durch Agrobacterium tumefaciens in Allium cepa und Hevea embryogenic calli. Nach dem Zählen der Transformationseinheiten zeigte die statistische Analyse der Daten, dass die pCamway 35S. UidA-Vektor war ebenso wirksam wie pCambia2301, ein pCAMBIA2300, das das uidA-Reportergen unter dem CaMV 35S-Promotor enthielt. Genetische Transformation Grünes fluoreszierendes Protein Copyright 2015 Elsevier B. V. Alle Rechte vorbehalten. TransBacter-Übersicht Nachfolgend finden Sie eine Liste der Materialien, die unter dem Transbacter-Projekt verfügbar waren. Jetzt können sie von verschiedenen Labors angefordert werden, die diese verwenden oder veröffentlichen. Sie umfassen lebende Bakterienstämme, die entweder mit einheitlichen und binären Vektoren transformiert werden, als auch mit CAMBIAs-Einheitsvektoren. (Die binären Vektoren waren unter dem GUSPlus-Projekt erhältlich.) TransBacter-Stämme / Einheitsvektoren Rhizobium leguminosarum bv. Trifolii-Stamm ANU845 pCAMBIA5105 (Km und Spec-Auswahl) Rhizobium leguminosarum bv. Trifolii Stamm ANU845 pCAMBIA5106 (Km und Spec-Auswahl) Sinorhizobium meliloti pCAMBIA 5105 (Km und Spec-Auswahl) Sinorhizobium meliloti pCAMBIA 5106 (Km und Spec-Auswahl) TransBacter Stämme / binäre Vektoren Mesorhizobium Loti pWBTi1 pCAMBIA1105.1R (Km und Spec-Auswahl) Rhizobium sp. NGR 234 pWBTi1 pCAMBIA1105.1R (Km und Spec Auswahl) Rhizobium sp. NGR 234 pWBTi3 pCAMBIA1105.1R (Km und Spec-Auswahl) Sinorhizobium meliloti pWBTi1 pCAMBIA1105.1R (Km und Spec-Auswahl) Sinorhizobium meliloti pWBTi3 (Km Auswahl) Sinorhizobium meliloti pWBTi3 pCAMBIA1105.1R (Km und Spec-Auswahl) Unitary Vektoren Dieser Vektor ist ein Teil einer neuen Serie von pCAMBIA GT-BACK-Vektoren (Gentransfer-Bacterial erworbene Kompetenz mit Kanamycin-Selektion), die nur die Vira, virB, Virc umfasst, eine modifizierte Version von pCAMBIA 1.105,1 und ein Fragment des Ti-Plasmid (abgeleitet von pTiBo542) enthält, VirD, virE, virG, virK amp virJ. Dieser neue einheitliche Vektor ermöglicht, dass die DNA-Transferfähigkeit in ein viel breiteres Spektrum von Bakterien bewegt und stabilisiert wird, und es wird als ein Open-Source-Toolkit bereitgestellt. Die zusätzlichen Eigenschaften des neuen Vektors gegenüber der Transbacter-Technologie sind: Sie können als Flecken von verdünnter DNA auf Papier verteilt werden (z. B. auf einem Brief), was die Notwendigkeit der Einhaltung von Importkontrollen an lebenden Organismen und anderen Quarantäneproblemen beseitigt. Dies ist das Mittel, mit dem buchstäblich Tausende von Laboratorien weltweit (und weiter gesendet) pCAMBIA-Vektorsets erhalten haben. GT-BacK-Vektors fehlt das RK2-abgeleitete oriT, das Transbacter trägt, wodurch die Fähigkeit des Plasmids eliminiert oder reduziert wird, konjugiert und durch RK-Konjugationsfunktionen an andere Wirte übertragbar zu sein. Es verfügt über einen breiten Wirtsbereich-Replikationsursprung aus pVS1, der ein viel breiteres Spektrum an Bakterien als Gentransfervektoren erforscht, was die Wahl von gutartigen Symbionten erlaubt, die keine physikalischen oder genetischen Spannungen auf Pflanzen verursachen. Klicken Sie hier um pCAMBIA5105 Plasmid Karte zu sehen pCAMBIA5106 ist noch eine reduzierte Version von pCAMBIA5105. Es fehlt virA und virK und hat eine virG (N54D) - Mutation im virG-Gen. Es ist kleiner als pCAMBIA5105, und weil es virA unabhängig ist, gibt es keine Notwendigkeit, Acetosyringone zu verwenden und scheint, sehr gut in Reis zu arbeiten. Ausführliche Beschreibung und Protokolle TransBactertrade konzentriert sich auf die Verwendung von Bakterien außerhalb der Gattung Agrobacterium für den Gentransfer auf Pflanzen. Segregierende Population von Nachkommen von Nicotiana, transformiert mit Sinorhizobium meliloti, enthaltend pCAMBIA1105.1R. Foto genommen von Dr. Brian Weir, CAMBIA. Seit der Entdeckung, dass Agrobacterium tumefaciens in den 70er Jahren in der Lage ist, Gene auf Pflanzen zu übertragen, ist es das wichtigste Instrument der Pflanzenbiotechnologie geworden. Es wird auch allgemein als die einzige bakterielle Gattung angesehen, die in der Lage ist, Gene auf Pflanzen zu übertragen. Wir haben gezeigt, dass verschiedene Arten von Bakterien außerhalb der Agrobacterium-Gattung modifiziert werden können, um den Gentransfer an verschiedene Pflanzen zu vermitteln. Bakterien aus zwei Familien und drei Gattungen Rhizobium sp. NGR234, Sinorhizobium meliloti und Mesorhizobium loti. Wurden für den Gentransfer durch Erfassung sowohl eines entwaffneten Ti-Plasmids als auch eines binären Vektors (info) kompetent gemacht. Stabile Transformation von drei Pflanzenarten, Tabak, Reis und Arabidopsis wurde mit diesen Nicht-Agrobacterium-Arten erreicht. Die Transformation wurde mit geringfügigen Modifikationen von veröffentlichten Protokollen durchgeführt, wobei Blattscheiben (info), scutellum-derived callus (info) bzw. florale Dip (info) Methoden verwendet wurden. Die resultierenden Pflanzen exprimierten Hygromycinresistenz und GUS-Aktivität, enthielten 1-3 Kopien der T-DNA durch Southern-Blot-Analyse und zeigten den normalen Bereich von T-DNA-Insertionen in Wirtsgenome durch PCR-vermittelte Sequenzierung von Integrationsstellen. Um sicherzustellen, dass der Gentransfer nicht durch Kontamination mit Agrobacterium-Zellen resultiert, wurden Kontrollen einschließlich speziesspezifischer PCR (info), selektiver Plattierung (info) und Verwendung eines markierten binären Vektors (info) implementiert. Somit können verschiedene Pflanzen-assoziierte Bakterien, wenn sie ein entwaffnetes Ti-Plasmid und einen binären Vektor (oder vermutlich ein Kointegrat oder vollständiges Ti-Plasmid) beherbergen, leicht in der Lage sein, T-DNA zu Pflanzen zu übertragen. Das Ti-Plasmid ist selbstübertragbar, was möglicherweise die Existenz eines ubiquitären natürlichen Mechanismus anzeigt, der den horizontalen Gentransfer von Bakterien zu Pflanzen bewirkt. Wenn dies der Fall ist, dann kann ein großer Teil der pflanzlichen genomischen DNA-Sequenz, die bislang bestimmt wurde, die bakteriell im Ursprung scheint, von einer solchen Übertragung über die jüngsten evolutionären Zeitskalen abgeleitet haben. Diese Alternative zur Agrobacterium-vermittelten Technologie kann zwei Vorteile bieten: Sie kann zu einer besseren Nutzung natürlicher Bakterien-Pflanzen-Wechselwirkungen führen, zum Beispiel mit gutartigen epiphytischen Bakterien, um eine effizientere und optimale Pflanzentransformation für Spezies zu erreichen, die sich als anspruchsvoll herausgestellt haben. Das umständliche Patentdickicht, das Agrobacterium-Gentransfertechnologie umgibt, hat dieses Werkzeug für die meisten Unternehmen, Institutionen und Einzelpersonen für kommerzielle Zwecke weitgehend unbrauchbar gemacht. Die Patente im Dickicht beziehen sich ausdrücklich auf Agrobacterium. Unsere Beobachtungen führen zu einer umfassenden Arbeit zu diesen Patenten, da die Spezies, die jetzt für den Gentransfer in der Lage sind, von Agrobacterium sehr verschieden sind. Diese neue Gentransfer-Technologie ist hier frei verfügbar durch diese neue Open-Source-inspirierte BIOS-Lizenz, die die ethische, gemeinsame und transparente Entwicklung und Nutzung der Technologie fördert (Nature 431: 494, 2004). Es wird in Betracht gezogen, dass dies dazu beitragen wird, die Dominanz der Pflanzentransformation durch einige multinationale Unternehmen zu brechen und einen hochkooperativen und öffentlich-spirituellen Technologieentwicklungsprozess zu schaffen. Dieser Schritt zur Unabhängigkeit von der Unternehmenskontrolle der Technologie ermöglicht es, vielfältige Anwendungen der Biotechnologie zu erschließen, wobei ein Schwerpunkt auf die Bedürfnisse der Entwicklungsländer der Welt, der Produktionsumgebungen und der Volkswirtschaften liegt. 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TransBacter ist ein Sammelbegriff für nicht-pathogene Bakterien, die modifiziert wurden, um Agrobacterium in Pflanzentransformationsprozessen ersetzen zu können. Bisher haben wir gezeigt, mit modifizierten Plasmiden, dass drei Arten von Bakterien, Sinorhizobium meliloti. Mesorhizobium loti. Und Rhizobium sp. NGR234 sind in der Lage, Gene unter bestimmten Umständen auf Pflanzen zu übertragen. TransBacter-Stämme wurden der wissenschaftlichen Gemeinschaft über eine BiOS-Lizenz zur Verfügung gestellt. Durch Verwendung von TransBacter kann es möglich sein, das derzeitige Lizenzierungsdickicht, das mit der Verwendung von Agrobacterium zur Pflanzentransformation involviert ist, zu umgehen (siehe Agrobacterium-vermittelte Transformation von Pflanzen-Technologielandschaft für weitere Informationen). Leider liefern wir keine TransBacter-Stämme mehr. Allerdings, wie Cambia ist die Platzierung seiner Technologie in der Öffentlichkeit, können Sie nun fordern Sie alle unsere Vektoren aus Laboren, die Verwendung oder veröffentlicht mit ihnen. Cambia ist mit dieser Anordnung ok und erfordert keine Zahlung oder Lizenz. Während wir unsere Rechte nicht gegen irgendwelche der pCAMBIA-Vektoren oder - Technologien geltend machen, können andere Rechte von Dritten bestehen, die mit Komponenten oder bestimmten Verwendungen in Verbindung stehen. Möglicherweise müssen Sie auch herausfinden, über Anforderungen für den Import der Bakterien in Ihr Land. CAMBIA übernimmt keine Haftung für die Vektoren oder für die Überprüfung dieser, weil jede Zuständigkeit und Institution können unterschiedliche Regeln, und die Einhaltung dieser ist die Verantwortung des Empfängers. Wenn Sie Informationen benötigen, um Formulare auszufüllen, können Sie diese auf dieser Website finden (siehe unten) oder Kollegen aus Ihrem Land über unser Diskussionsforum fragen. Wir ermutigen Menschen, die diese Bakterien importiert haben, um die von ihnen verwendeten Informationen zu veröffentlichen. Die Patentanmeldungen und Warenzeichen von CAMBIA werden öffentlich zugänglich gemacht. CAMBIA erhielt keinen Gewinn aus dem Verkauf, der Nutzung oder der Auslizenzierung von TransBacter. Die Technologie wurde auf Kosten von CAMBIA patentiert, um die Rechte, die Technologie im Einklang mit den Prinzipien der Open Source zu praktizieren, zu verwalten. Ein Unternehmen kann eine Lizenz zur Nutzung der Technologie nur erwerben, indem es allen Lizenzbestimmungen zustimmt, einschließlich anderer Lizenznehmer, Verbesserungen und Biosicherheitsdaten zu verwenden. Ein Unternehmen, das versucht, Patente auf die Verbesserungen gegen andere zu erzwingen, erlischt ihre Lizenz und haftet für eine Zuwiderhandlung. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass CAMBIAs Berechtigung zur Nutzung der Technologien eine Lizenzinstitution dazu ermöglichte, ihre Mitarbeiter und Studenten zu ermutigen, Verbesserungen der Technologien auf dieser Website vorzunehmen. Die Lizenznehmerinstitution verpflichtet sich außerdem, keine geistigen Eigentumsrechte an den Verbesserungen gegenüber anderen Lizenznehmern geltend zu machen. Alle Lizenznehmer, die diese Lizenzbestimmungen einhalten, dürfen die Technologie für Forschung, öffentliche und / oder kommerzielle Produktentwicklung nutzen. Auch Unternehmen mit gemeinnütziger Regierungsführung sollten uns bei der Deckung der Kosten wie der Bereitstellung dieser Website und aller verbesserten Protokolle unterstützen. Allerdings erfordert die CAMBIAs BiOS-Lizenz keine Verpflichtung zur Rückerstattung von Patentierungskosten sowie keine Meilensteinzahlungen oder Lizenzgebühren. Alle BiOS-Lizenzen waren vollständig lizenzgebührenfrei. Es ist nicht mehr erforderlich, eine Lizenz zur Verwendung von TransBacter-Stämmen für gemeinnützige oder gemeinnützige Zwecke zu haben. Alte Kopien der BiOS-Lizenz für Pflanzenfreigabetechnologien (info) und des beigefügten Technologietransfer-Abkommens sind auf der BiOS-Website verfügbar. BiOS-Lizenzen sind von CAMBIA vollständig lizenzgebührenfrei für Forschungs - und kommerzielle Zwecke erhältlich. Sehr wenige Unternehmen machen einen Gewinn auf Patentlizenzen Patente sind teuer zu archivieren und zu pflegen. CAMBIA machte keinen Gewinn mit seinen Lizenzen. Wir sind eine gemeinnützige Organisation. Keine Registrierung erforderlich. Lizenzvereinbarungen von CAMBIA sind sowohl für gemeinnützige als auch gemeinnützige Unternehmen erhältlich. CAMBIA glaubt, dass der Hunger in vielen Teilen der Welt nicht nur durch die Bereitstellung von Werkzeugen für die Öffentlichkeit gut Forscher in diesen Gemeinden, sondern auch durch die Beseitigung von Barrieren für Kleinstunternehmen, kleine und mittlere Unternehmen gemildert werden kann. IBM, Nokia, Sun und andere IT-Unternehmen haben gezeigt, dass die Hard - und Software-Technologie nicht-exklusiv und Open-Source-lizenziert und gleichzeitig die Rentabilität in einem gewinnorientierten Unternehmen generieren kann. BiOS-konforme Lizenzen ermöglichen es, dasselbe für Life Sciences Produkte zu machen. Ja, Sie können anfordern, Stämme von Ihrem Kollegen zu verwenden und Cambia erfordert keine Zahlung oder Lizenz mehr. Jede Zuständigkeit hat unterschiedliche Regeln. Sie müssen herausfinden, ob es irgendwelche Einfuhr - / Sitteanforderungen für das Versenden dieser Belastungen zu Ihrem Land gibt. Sobald Sie die entsprechenden Formulare erhalten haben, sollten diese häufig gestellten Fragen und andere Informationen auf der Website geben Ihnen genügend Informationen, um die Formulare ausfüllen. Wir ermutigen Menschen, die diese Bakterien importiert haben, um die von ihnen verwendeten Informationen zu veröffentlichen. Weitere Informationen finden Sie unter Allgemeine Informationen zu TransBacter (info), die die Informationen enthält, die ein Empfänger innerhalb der USA benötigt, um eine USDA-APHIS-Genehmigung erfolgreich zu erhalten. Je nach Anforderung eines Labors enthält das Kit Bakterienstämme (z. B. Sinorhizobium meliloti, Rhizobium sp. Oder Mesorhizobium loti). Jeder Bakterienstamm kann individuell auf 1,5 ml YM-Agar-Medium in einem verschlossenen Plastikröhrchen gestreift werden. Die Anzahl der Bakterien enthaltenden Röhrchen auf dem Medium hängt von der Anzahl der benötigten Bakterienstämme ab. PCAMBIA1105.1R ist speziell für die Verwendung mit TransBacter-Stämmen vorgesehen. Die R bedeutet das Vorhandensein einer multiplen Klonierungsstelle mit einem Größenmarker, der sie von pCAMBIA1105.1 unterscheidet. Einige Varianten dieses Vektors sind nun verfügbar. PCAMBIA1105.1 ist für die Verwendung mit Agrobacterium-Kontrollen bestimmt. Eine Beschreibung und Karten dieser Vektoren können hier heruntergeladen werden. Die Stämme, die wir verteilen, werden dadurch modifiziert, dass sie ein Derivat des pTiBo542-Plasmids von Agrobacterium tumefaciens enthalten. PTiBo542 wurde entwaffnet, indem beide seiner T-DNA-Regionen deletiert wurden, um pTiEHA101 (mit einem nptI-Gen anstelle der deletierten T-DNA) und pTiEHA105 (ohne fremde DNA, die anstelle der deletierten T-DNA insertiert wurde) zu erzeugen. Für Details siehe Hood et al., 1986 J Bact 168: 1291-1301 und Hood et al., 1993, Trans Res. 2: 208 & ndash; 218. PTiEHA105 wurde an CAMBIA durch homologe Rekombinationsinsertion eines pCR2.1TOPO-Plasmids (Invitrogen Inc.), enthaltend ein RK2 ori T (amplifiziert aus pSUP202 mit den Primern EVS49 und EVS50 - siehe Stabb und Ruby 2002 Methods Enzymol. 358: 413-426) und modifiziert Das vir G-Gen, um pTiWB1 oder das moa-A-Gen zu erzeugen, um pTiWB3 zu erzeugen. Einige Stämme enthalten auch den binären Vektor pCAMBIA1105.1R mit einem GUSPlus-Reporter-Konstrukt (siehe GUSPlus-Projekt). Mehrere Stämme und Kombinationen sind jetzt von verschiedenen Labors auf der ganzen Welt verfügbar. Top Warum kann ich nicht Mesorhizobium loti oder Rhizobium sp. NGR234 ohne pCAMBIA1105.1R darin. In beiden Fällen wurde der Stamm zuerst durch Elektroporation mit pCAMBIA1105.1R transformiert und die modifizierten Ti-Plasmide pWBTi1 oder pWBTi3 wurden als nächstes durch triparische Paarung von Sinorhizobium meliloti eingeführt. Sie sollten in der Lage, diese Bakterien des binären Plasmids durch Wachstum in nicht-selektiven Bedingungen (keine Spectinomycin oder Streptomycin) für einige Generationen zu heilen, gefolgt von Replikatierung auf Medien mit und ohne spec (oder strep) zum Screening für Kolonien, die geworden sind Empfindlich. Eine schnellere Methode wäre, in ein anderes pCAMBIA-Plasmid (oder ein anderes Plasmid mit demselben Grundgerüst, wie die pPZP-Plasmide) zu transformieren und für sein Resistenzgen zu selektieren. Dies sollte bounce pCAMBIA1105.1R da Zellen dont gerne zwei verschiedene Plasmide mit dem gleichen Replikon zu halten. Sie sollten immer noch Bildschirm für den Verlust der Spezifikation / Strep Widerstand aber sicherzustellen. Wir haben Erfahrung mit TransBacter, um Tabak, Arabidopsis und Reis zu verändern. Andere Labore haben ähnliche Erfolge und versuchen andere Arten. Wir ermutigen Sie, TransBacter auf dem Organismus zu verwenden, den Sie erforschen. Ihr Staat oder Land kann Genehmigungen für die Belastungen erfordern. Die Bedingungen der BiOS-Lizenz verlangen, dass die Empfänger alle geltenden Gesetze einhalten. Wir versuchen, wann immer möglich, um Anfragende zu einem BiOS-Referenzlabor in der gleichen Nation für die Umverteilung von Materialien zu verweisen. Je nach den geltenden Gesetzen in Ihrem Land kann dies dazu beitragen, Import - und Quarantänebeschränkungen zu minimieren. Wenn Sie die Stämme oder Vektoren und möchten ein BiOS-Referenz-Labor in Ihrem Land zu replizieren und senden die Belastungen in unserem Namen sein, senden Sie uns bitte eine E-Mail. Werden Sie BiOS Referenzlabor in Ihrem Land und helfen Sie uns, Stämme zu verteilen. Verwenden Sie TransBacter Sagen Sie Ihre Kollegen über TransBacter und ermutigen sie, es in ihrer Forschung zu verwenden. Für weitere Informationen, wie Sie helfen können, verwenden Sie die Links auf der linken Seite unter Wie kann ich beitragen Wie kann ich auf diese Technologie zugreifen / verwenden / erhalten? Wenn Sie eines der von CAMBIA angebotenen Materialien erhalten möchten, folgen Sie bitte den untenstehenden Anweisungen: Häufig gestellte Fragen Fragen: Akademische oder gemeinnützige Forschungseinrichtungen Das TransBacter Antragsformular herunterladen und ausfüllen. Die Unterzeichnung des Antragsformulars stellt eine Vereinbarung mit dem Pflanzen-Enabling Technologies BiOS PDF Version 1.5 (info) und dem dazugehörigen Bios Technology Support Agreement dar. Wenn Sie Materialien von einem Freund erhalten, müssen Sie die entsprechende Lizenz signieren und an uns zurückschicken, aber Sie müssen kein Geld bezahlen. Profit-Unternehmen Sowohl die Pflanzenschutz-Technologien BiOS PDF Version 1.5 (info) als auch die dazugehörigen Technologietransfer-Vereinbarungen müssen von einem zuständigen Beamten einer gewinnorientierten Gesellschaft (oder einem anderen Institut, das von der CAMBIA-Technologie profitieren will) unterzeichnet werden Materialien von CAMBIA. Diese Lizenzen und mehr erhalten Sie auf der BiOS-Website. Anlagen-Enabling-Technologien BiOS-Lizenznehmer erhalten automatisch Zugriff auf das TransBacter-BIOS-Projekt und das GUSPlus-BIOS-Projekt (nur von Dritten zugänglich, die denselben Lizenzbestimmungen zugestimmt haben), wo es die Verfügbarkeit der neuesten verbesserten Protokolle und Möglichkeiten bietet Diskutieren technische Fragen, Probleme und Verbesserungen und teilen Ergebnisse, Ideen, Beobachtungen, Fragen und Daten mit anderen BiOS-Lizenznehmern. Eine Zusammenfassung der BiOS-Lizenzbedingungen folgt: Im Gegenzug zu den Vorteilen der Technologien verpflichtet sich ein Lizenzinstitut, seine Mitarbeiter und Studenten zu ermächtigen, Verbesserungen an den Technologien und Sicherheitsinformationen, die für die Nutzung der Technologie und potenziellen Regulierungsmaßnahmen relevant sind, zu verbessern Genehmigung der Produkte, die sie verkörpern, und verpflichtet sich, keine geistigen Eigentumsrechte an den Verbesserungen und Informationen gegen andere Lizenznehmer geltend zu machen. Unternehmen, die zuvor eine Forschungslizenz für GUS durchgeführt haben, müssen eine GUS-kommerzielle Lizenz ausführen. Weitere Informationen Bitte lesen Sie die häufig gestellten Fragen - TransBacter. Informationen über diese Lizenzen erhalten Sie per E-Mail. Eine Zusammenfassung der BiOS-Lizenzbedingungen folgt: Im Gegenzug zu den Vorteilen der Technologien verpflichtet sich ein Lizenzinstitut, seine Mitarbeiter und Studenten zu ermächtigen, Verbesserungen an den Technologien und Sicherheitsinformationen, die für die Nutzung der Technologie und potenziellen Regulierungsmaßnahmen relevant sind, zu verbessern Genehmigung der Produkte, die sie verkörpern, und verpflichtet sich, keine geistigen Eigentumsrechte an den Verbesserungen und Informationen gegen andere Lizenznehmer geltend zu machen. Kontaktieren Sie Richard oder Osmat Jefferson, wenn Sie weitere Fragen zu diesem Projekt haben. Es wurde angenommen, dass die Informationen auf dieser Seite korrekt waren. Neue Patente und Patentanmeldungen, veränderte Patenterteilung und Rechtsprechung können zu Veränderungen in der Landschaft geführt haben. CAMBIA übernimmt keine Gewähr, dass es zu diesem Zeitpunkt korrekt oder aktuell ist und übernimmt keinerlei Haftung für jegliche Verwendung, die daraus gemacht werden könnte. Korrekturen oder Aktualisierungen der Informationen sind willkommen, bitte senden Sie eine E-Mail an infobios. net. Warum die meisten Menschen wählen pCambia-Vektoren für die Klonierung in transgenen Pflanzen 1. pCambia-Vektoren sind verbesserte Version von binären Vektoren für Pflanzentransformation. Wie in ihrer Website Beschreibungen von pCambia-Vektoren erwähnt, neigen die alten Binärvektoren dazu, die folgenden Nachteile zu haben: (1) Niedrig kopierender Replikationsursprung, der zu DNA-präps (2) instabilen Replikaten mit geringer Ausbeute führt, wodurch ein variabler Verlust des Plasmids während der Ausbreitung verursacht wird (3) große Größe (4) Mangel an geeigneten Restriktionsstellen für die Manipulation (5) begrenzte Auswahl an selektierbaren Markern für Bakterien und Pflanzen (6) Mangel an einfachen Möglichkeiten zum Aufbau von Reportergen-Fusionen 2. pCambia-Vektoren werden verbessert, um eine hohe Kopie zu haben Zahl in E. coli für hohe DNA Ausbeuten für das einfache Klonen 3. pCambia Vektoren sind kleine Größe. Mit ausreichender Multiple Cloning Site (MCS) zum Einfügen Ihres Gen-of-Interest 4. pCambia-Vektoren haben den beliebtesten Promotor: 35S-Promotor. Haben die am meisten verwendeten Pflanzen-selektierbaren Marker: Kanamycin oder Hygromycin B und haben die am meisten benutzte screenable Marker: GUS 5. Eine Reihe von pCambia-Vektoren wurden entwickelt, die verschiedene Forscher für verschiedene Projekte brauchen 6. Am wichtigsten ist, sind pCambia-Vektoren eine offene Quelle , Bauen auf frei zu bedienen, kann jeder sehen cambia. org/daisy/cambia/585 für detail Alle Antworten (7) pCAMBIA hat breite Palette von Vektor wie 1300,2300,2301. Es ist binärer Vektor Kanamycin, der mit kleinem Replikon basiert und das Pflanzenauswahlgen hat, das im Pflanzensystem sehr gut ausgedehnt werden kann. Dies sind die geeigneten Kriterien für die Verwendung dieses Vektors bei der transgenen Pflanzenentwicklung. Kamal Kumar middot Nationales Institut für Pflanzengenomforschung Die Auswahl der Vektoren durch die Forschergemeinde wird hauptsächlich durch 1. Verfügbarkeit und Nützlichkeit getrieben. 2. pCAMBIA-Reihe sind hohe Kopienzahlvektoren, und die Selektion in Pflanzen ist Kanamycin oder Hygromycin-Gen, das in der Nähe von LB von t-DNA liegt, die im Gegensatz zu dem früher verwendeten weit verbreiteten Vektor pBI121 ist, der Kanamycin-Selektion gegenüber RB von T-DNA aufweist Niedrige Kopie. Die geringe Kopie behindert die Plasmidisolierung / - klonierung. Das Vorhandensein von Pflanzenselektionsmarkern gegen LB hilft bei der Eliminierung von falsch positiven transgenen Pflanzen (Pflanzen, die für das Gen von Interesse negativ und für den Pflanzenselektionsmarker positiv sind), da der T-DNA-Transfer aus RB von T-DNA von Agrobacterium stammt. 3. Nun gibt es viele Optionen gibt es so sehen Sie mehr breite Palette von Vektor-Serie. 1. pCambia-Vektoren sind verbesserte Version von binären Vektoren für die Pflanzentransformation. Wie in ihrer Website Beschreibungen von pCambia-Vektoren erwähnt, neigen die alten Binärvektoren dazu, die folgenden Nachteile zu haben: (1) Niedrig kopierender Replikationsursprung, der zu DNA-präps (2) instabilen Replikaten mit geringer Ausbeute führt, wodurch ein variabler Verlust des Plasmids während der Ausbreitung verursacht wird (3) große Größe (4) Mangel an geeigneten Restriktionsstellen für die Manipulation (5) begrenzte Auswahl an selektierbaren Markern für Bakterien und Pflanzen (6) Mangel an einfachen Möglichkeiten zum Aufbau von Reportergen-Fusionen 2. pCambia-Vektoren werden verbessert, um eine hohe Kopie zu haben Zahl in E. coli für hohe DNA Ausbeuten für das einfache Klonen 3. pCambia Vektoren sind kleine Größe. Mit ausreichender Multiple Cloning Site (MCS) zum Einfügen Ihres Gen-of-Interest 4. pCambia-Vektoren haben den beliebtesten Promotor: 35S-Promotor. Haben die am meisten verwendeten Pflanzen-selektierbaren Marker: Kanamycin oder Hygromycin B und haben die am meisten benutzte screenable Marker: GUS 5. Eine Reihe von pCambia-Vektoren wurden entwickelt, die verschiedene Forscher für verschiedene Projekte brauchen 6. Am wichtigsten ist, sind pCambia-Vektoren eine offene Quelle , Bauen auf frei zu betreiben, jeder kann sehen, siehe cambia. org/daisy/cambia/585 für Details Aarn Barraza middot Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroeste pCAMBIA Vektoren sind sehr geeignet für das Klonen mit dem Zusatz, der Kanamycin-Selektion Gen-Marker , Um die codierenden Sequenzen für GFP und GUS als Reportergene zu haben, und auch diese Reporter sind fusioniert (GFP :: GUS oder GUS :: GFP), um Ihrem Genprodukt mit konfokaler Mikroskopie zu folgen oder die Gewebe auszuwählen, wenn das Genprodukt vorhanden ist X-Gluc-Abbau. Haben Sie eine Frage, die Sie schnell beantwortet haben müssen